Overenie účinku sterilizácie autotokve

Jedným zo základných laboratórnych nástrojov v mikrobiologickom laboratóriu je sterilizátor, pričom najbežnejšie používaný typ sú autoklávy. Podľa GB 4789.1-2016 by sa laboratórne vybavenie malo pravidelne kontrolovať a/alebo kalibrované (s vhodným označením), udržiavané a obsluhované, aby sa zabezpečilo prevádzkový výkon a bezpečnosť. Ale prechádza váš sterilizátor podobnými inšpekciami? Ak je potrebné takéto validáciu, ako by sa mala vykonávať?

Dnes sumarizujeme kľúčové aspekty validácie účinnosti sterilizácie pre autoklávy.

Bežné metódy na overenie účinnosti sterilizácie autoklávu zahŕňajú metódu chemickej indikátora, metódu teplomeru s pevným bodom, metódu sondy s vlastnou teplotou a metódu biologického indikátora. Princípy týchto metód sú podobné, primárne sa zameriavajú na overenie, či teplota vo vnútri sterilizátora dosiahne požadovanú úroveň počas sterilizácie. V závislosti od špecifických podmienok laboratória je možné zvoliť na validáciu jednu alebo viac metód.

1. Metóda chemického indikátora
Princíp: Chemické ukazovatele podliehajú zmene alebo deformácii farieb, keď sú vystavené špecifickej teplote a trvaniu, čo umožňuje posúdenie, či boli splnené parametre sterilizácie.

Bežne používaným indikátorom v laboratóriách je 3M indikátorová páska AutocLave, ktorá mení farbu pred a po sterilizácii, ktorá naznačuje účinnosť. Táto páska je vyrobená z tepelne citlivých chemikálií a farebných látok vytlačených v pruhoch na špeciálnej lepiacej páske. Páska by sa mala aplikovať na vonkajšiu stranu obalu s minimálnou dĺžkou 5 cm a pevne stlačená na lepšiu adhéziu a utesnenie. Po sterilizácii pri 121 ° C počas 20 minút alebo 130 ° C počas 4 minút sa diagonálne biele pruhy na páske úplne čierne. Ak je zmena farby nerovnomerná alebo neúplná, balík nemusí mať podmienky sterilizácie.

2. Metóda teplomeru s pevným bodom
Princíp: Táto metóda používa ortuťový teplomer, ktorý si zachováva najvyššiu dosiahnutú teplotu, podobnú tradičnému klinickému teplomeru. Pomáha určiť maximálnu teplotu dosiahnutú vo vnútri autoklávu počas sterilizácie.

Na validáciu je vo vnútri veľkej kužeľovej banky naplnenej vodou umiestnený ortuťový teplomer. Počas sterilizácie je banka umiestnená na horných aj dolných častiach autoklávu. Po sterilizácii sa odčítanie teplomeru skontroluje oproti požadovanej teplote. Táto metóda však overuje iba teplotu a nepotvrdzuje, či trvanie sterilizácie bolo dostatočné, čo z nej robí najzákladnejší štandard pre validáciu autoklávu.

3. Metóda s vlastnou teplotou sondy
Princíp: Táto metóda využíva charakteristiky topenia a rekryštalizácie určitých chemikálií, keď sú vystavené tepla. Utesnením týchto chemikálií vo vnútri malých sklenených skúmaviek a ich umiestnením do autoklávu môže tvorba kryštálov po sterilizácii naznačovať, či bola dosiahnutá požadovaná teplota.

Bežne používaným činidlom je kyselina benzoová, ktorá má teplotu topenia 121–123 ° C, čo úzko zodpovedá požadovanej sterilizačnej teplote. Počas sterilizácie je kyselina tuhá benzoová utesnená v malej sklenenej skúmavke a umiestnená vo vnútri autoklávu. Po procese sa skúma kryštálová štruktúra kyseliny benzoovej, aby sa určilo, či bola dosiahnutá požadovaná teplota.

Rovnako ako metóda teplomeru s pevným bodom, aj tento prístup naznačuje iba teplotu a nemôže potvrdiť, či trvanie sterilizácie postačovalo.

4. Metóda biologického indikátora
Princíp: Táto metóda používa nepatogénne spóry Geobacillus stearothermophilus ako indikátorové organizmy na vyhodnotenie účinnosti tepelnej sterilizácie. Tieto spóry sú vysoko odolné voči teplu a majú tepelnú rezistenciu podobnú spórmi botulinimu Clostridium, čo z nich robí spoľahlivý odkaz na vyhodnotenie, či autokláve spĺňa požiadavky na sterilizáciu.

Biologické ukazovatele sa dodávajú v troch formách:

Spór
Prúžky
Spore prúžky kombinované s kultivačným médiom (trubice biologických indikátorov)
Biologické ukazovatele sa zvyčajne umiestnia na päť miest vo vnútri sterilizačnej komory:

Spodná úroveň: predná, stredná a chrbát
Horná úroveň: Stred
Po sterilizácii sa indikátory naočkujú do bromokresolovej fialovo-glukózovej peptónovej vody a inkubujú sa pri 55–60 ° C počas 2–7 dní:

Ak kultivačné médium zostáva jasné a nezmenené farby, spóry boli usmrtené, čo naznačuje účinnú sterilizáciu.
Ak médium so žltým a zakaleným, spóry prežili, čo znamená, že proces sterilizácie bol neúčinný.
Rovnaká metóda validácie sa vzťahuje na suspenzie spór a prúžky spór.

Mnohé laboratóriá tiež používajú komerčné biologické indikátorové trubice, ktoré fungujú podobne ako spórske suspenzie a prúžky. Tieto trubice obsahujú spóry G. stearothermophilus spolu so sklenenou ampulkou kultivačného média. Po autokláve je sklenená ampulka vo vnútri trubice rozdrvená, aby sa uvoľnilo kultivačné médium, a trubica sa inkubuje pri 56 ° C, pričom je súčasťou pozitívnej kontroly.

Ak bola sterilizácia neúčinná, životaschopné spóry porastú, čím sa vývar žltý.
Ak bola sterilizácia úspešná, spóry sa inaktivujú a vývar zostáva fialová.
Frekvencia validácie autoklávu
V súčasnosti neexistujú žiadne prísne regulačné normy, ktoré definujú, ako často musia byť autoklávy overené. Laboratóriá by však mali stanoviť svoj vlastný harmonogram validácie a striktne ho dodržiavať.

Pre ľahkú prevádzku a spoľahlivú validáciu sa dôrazne odporúčajú chemická indikátorová páska a biologické indikátorové trubice. Tieto metódy sú užívateľsky prívetivé a poskytujú komplexné hodnotenie účinnosti sterilizácie.

Kľúčové úvahy pre autokláciu
(Niektoré plne automatizované importované autoklávy nemusia vyžadovať manuálne odvetenie)

Pri použití autoklávu je nevyhnutné odstrániť studený vzduch z komory pri zavádzaní pary. Výfukový prieduch by mal zostať otvorený, až kým nie je vylúčený všetok studený vzduch, čím sa zabezpečí rovnomerné rozdelenie teploty vo vnútri.

Ak nejaký vzduch zostáva vo vnútri komory, môže tlakomer naznačovať správny tlak, ale skutočná teplota bude nižšia, ako sa očakávalo. Čím viac zvyšku vzduchu, tým väčší je nezrovnalosť, čo vedie k neúplnej sterilizácii.

(Pre tých, ktorí sa stretávajú s vzduchovými bublami v malých skúmavkách pri sterilizácii médií založených na kvasení, skúste zvýšiť evakuáciu vzduchu, aby ste zlepšili výsledky.)