Overenie účinnosti sterilizácie autoklánov

Jedným z najdôležitejších nástrojov v mikrobiologickom laboratóriu je najbežnejšie používaný sterilizátor, pričom najbežnejšie sa používa autokláve (vysokotlakový parný sterilizátor). Podľa GB 4789.1-2016 by sa laboratórne vybavenie malo pravidelne kontrolovať a/alebo kalibrované (s inšpekčnými značkami), udržiavané a obsluhované, aby sa zabezpečila správna výkonnosť a prevádzková bezpečnosť. Ale prešla vaša autokláve takéto inšpekcie? A ak chcete vykonať overenie, ako by ste to mali urobiť? Dnes sumarizujeme kľúčové metódy na overenie účinnosti sterilizácie autoklávov.

Overenie účinnosti sterilizácie autoklávu Všeobecne zahŕňa metódy, ako je chemický indikátor, maximálny teplomer, samostatne vyrobená teplotná trubica a biologický ukazovateľ. Aj keď tieto metódy zdieľajú podobné princípy - čo je hlavne potvrdzujúce, či sterilizátor dosiahne požadovanú teplotu počas sterilizácie - môžete si vybrať jeden alebo viac na základe špecifických podmienok vášho laboratória.

1. Metóda chemického indikátora

Princíp: Chemické indikátory prechádzajú zmenou farby alebo tvaru za špecifických podmienok teploty a časov. Táto zmena sa používa na určenie, či boli splnené parametre sterilizácie.

Bežne používanou položkou v laboratóriách je 3M indikátorová páska AutoClave, ktorá mení farbu po sterilizácii. Páska je vyrobená z termosenzitívnych chemikálií, farebných vývojárov a maľovacích materiálov, vytlačených v prúžkovom vzorke na lepiacom páske. Používa sa priamo na vonkajšiu stranu sterilizačného balíka s minimálnou dĺžkou 5 cm. Ľahko stlačte pásku, aby ste zaistili dobrú adhéziu a utesnenie. Po vystavení 121 ° C po dobu 20 minút alebo 130 ° C počas 4 minút by mali diagonálne biele pruhy na páske úplne čierne. Ak je zmena farby nerovnomerná alebo neúplná, balenie sa považuje za správne sterilizované.

2. Metóda maximálneho teplomeru

Princíp: Táto metóda používa ortuťový teplomer, ktorý sa po zahriatí nevracia k nižšej teplote, podobne ako tradičný lekársky teplomer. Označuje maximálnu teplotu dosiahnutú počas sterilizácie.

Na overenie vložte teplomer ortuti do Erlenmeyerovej banky naplnenej vodou. Počas sterilizácie umiestnite banku na horné a dolné časti autoklávu. Po procese skontrolujte, či čítanie teplomeru zodpovedá požadovanej teplote. Táto metóda môže overiť iba teplotu a nemôže potvrdiť, či bola splnená požiadavka na čas sterilizácie, takže predstavuje minimálny štandard na overenie autoklávu.

3. Metóda samoobslužnej teploty trubice

Princíp: Táto metóda využíva určité chemikálie, ktoré sa topia a rekryštalizujú pri špecifických teplotách, s výraznými kryštálovými formami po chladení. Tieto chemikálie sú utesnené v malých sklenených skúmavkách a umiestnené vo vnútri autoklávu. Po sterilizácii sa skúma tvar kryštálu, aby sa zistilo, či bola dosiahnutá správna teplota.

Kyselina benzoová sa bežne používa, s bodom topenia 121–123 ° C, čo je zarovnané so štandardnou sterilizačnou teplotou autokláve. Kyselina tuhá benzoová je utesnená v malých sklenených skúmavkách a umiestni sa do autoklávu. Po sterilizácii sa pozoruje stav kyseliny benzoovej, aby sa potvrdilo, či sa dosiahla cieľová teplota. Rovnako ako metóda maximálneho teplomeru, aj tento prístup overuje iba teplotu, nie trvanie sterilizácie.

4. Metóda biologického indikátora

Princíp: Táto metóda používa nepatogénne spóry Geobacillus stearothermofilus ako indikátorové organizmy na vyhodnotenie účinnosti tepelnej sterilizácie. Tieto spóry sú vysoko odolné voči tepelne, s rezistenciou podobnou ako pri patogénnych spóroch botulinínových spór Clostridium, vďaka čomu sú vhodné ukazovatele na overenie účinnosti sterilizácie.

Biologické ukazovatele sú k dispozícii v troch formách: suspenzie spór, prúžky spór a integrované rúry spór a médium. Zvyčajne sú umiestnené na piatich miestach v sterilizačnej nádobe: predná, stredná a zadná časť spodnej vrstvy, ako aj stredné body horných a stredných vrstiev. Po sterilizácii sa indikátory naočiavajú do vody bromokresolu fialovo-glukóz-peptón a inkubujú sa pri 55–60 ° C počas 2–7 dní. Ak médium zostáva čisté a nezmenené farby, spóry boli usmrtené, čo naznačuje dobrú sterilizáciu. Ak médium je žlté a zakalené, spóry prežili, čo naznačuje zlý výkon sterilizácie. Podesávanie spór aj prúžky spór sa riadia rovnakým procesom validácie.

V laboratóriách sa bežne používajú komerčné biologické indikátorové trubice. Obsahujú spóry Geobacillus stearothermophilus a utesnenú sklenenú ampulku s rastovým médiom. Rúrky sú umiestnené v celej sterilizačnej nádobe. Po autokláve je sklenená ampulka rozdrvená, aby sa uvoľnila médium, a trubica sa inkubuje pri 56 ° C spolu s pozitívnou kontrolou. Ak je sterilizácia nedostatočná, prežívajúce spóry budú rásť a žltý vývar. Ak je sterilizácia účinná, spóry sa inaktivujú a vývar zostáva fialová.

Frekvencia overovania

V súčasnosti neexistuje prísny národný štandard týkajúci sa frekvencie overovania účinnosti autoklávu. Očakáva sa, že laboratóriá vytvoria svoje vlastné harmonogramy overovania a prísne ich dodržiavajú. Vzhľadom na ľahké použitie a spoľahlivosť výsledkov odporúčame použiť indikátorovú pásku v kombinácii s biologickými indikátorovými trubicami, pretože ponúkajú jednoduchú prevádzku a komplexné overenie účinnosti sterilizácie.

Poznámky k sterilizácii (nevyžadujú sa pre niektoré importované plne automatické autoklávy)
Pri použití vysokotlakového parného sterilizátora je rozhodujúce vylúčiť všetok studený vzduch vo vnútri komory pri uvoľňovaní pary. Až po odstránení studeného vzduchu, ak je výfukový ventil zatvorený. Ak zostáva nejaký vzduch, tlakomer môže označiť správny tlak, ale skutočná teplota vo vnútri komory zaostáva. Čím viac vzduchu je zachovaný, tým väčší je rozdiel medzi tlakom a teplotou, čo potenciálne vedie k neúplnej sterilizácii. (Toto sa často pozoruje počas sterilizácie fermentačného média, kde vzduchové bubliny zostávajú v malých vodiacich skúmavkách - dôkladnejšie vyčerpávajú studený vzduch.)